SDS裂解液
● 產(chǎn)品包裝：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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RL1060
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SDS裂解液
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100
ml
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● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液，其主要成分是Tris (pH8.0)， SDS，EDTA等。SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。由于SDS裂解液有較強(qiáng)的裂解能力，IP或Co-IP實(shí)驗(yàn)不建議使用該裂解液。由于含有較高濃度的SDS等干擾物質(zhì)，不能用傳統(tǒng)Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度，可以使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：RTP7102）或Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（去垢劑兼容型）（貨號(hào)：RTP7104）測(cè)定蛋白濃度。
● 貯存、效期及運(yùn)輸：
常溫保存；有效期2年；常溫運(yùn)輸。
● 注意事項(xiàng)：
1. 需自備蛋白酶抑制劑如PMSF。
2. 如果使用本SDS裂解液用于ChIP實(shí)驗(yàn)，在對(duì)超聲后基因組DNA大小進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果采用瓊脂糖凝膠中添加花菁素類染料如GelRed或類似染料或使用含該類染料的DNA上樣緩沖液時(shí)，由于電泳時(shí)SDS會(huì)與此類染料結(jié)合形成異常條帶，條帶通常在600-1000 bp左右，因此會(huì)對(duì)超聲后基因組DNA大小的判斷造成一定的影響。建議采用后染方法即“電泳完畢后對(duì)瓊脂糖凝膠染色”的方式進(jìn)行條帶大小的檢測(cè)，使用該方法不會(huì)有異常條帶出現(xiàn)，不影響對(duì)超聲后基因組DNA大小的判斷，而且條帶大小更準(zhǔn)確。
● 使用說(shuō)明：
1. 準(zhǔn)備SDS裂解液：
取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入1/100體積的100 mM PMSF（貨號(hào)：PM1790），使PMSF的最終濃度為1 mM或加入其他蛋白酶抑制劑。
注：SDS裂解液低溫會(huì)析出結(jié)晶，以下操作需保持常溫操作。
2. 細(xì)胞蛋白提?。?/b>
2.1 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，加入適量1×PBS，輕柔漂洗一遍，不要擾動(dòng)貼壁細(xì)胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸，用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞收集于1.5 ml離心管中。
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培養(yǎng)板規(guī)格/培養(yǎng)皿表面積
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細(xì)胞量
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裂解液推薦使用量
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100 mm培養(yǎng)皿
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1.5×107
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0.5-1 ml
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60 mm培養(yǎng)皿
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5×106
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0.25-0.5 ml
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35 mm培養(yǎng)皿
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2×106
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0.2-0.4 ml
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6孔板
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2.5×106
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100-200 μl
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24孔板
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5×105
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100-150 μl
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96孔板
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1×105
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50-100 μl
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2.2 懸浮細(xì)胞：450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞；用適量1×PBS重懸細(xì)胞，450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞；重復(fù)漂洗細(xì)胞一次；按照細(xì)胞沉淀體積（PCM）20 μl加入200 μl 裂解液的比例加入SDS裂解液，混勻細(xì)胞沉淀。
注：2×106 Jurkat細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀體積（PCM，Packed Cell Volume）大約為20 μl。
2.3 裂解細(xì)胞：
2.3.1 裂解混合物超聲波處理（超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整）；如沒(méi)有超聲破碎儀，可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次（貨號(hào)：PE2719 ，蛋白提取針頭套裝），以徹底裂解細(xì)胞。
注：裂解中細(xì)胞會(huì)釋放出變性的核酸，呈團(tuán)狀粘稠透明樣，如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理，會(huì)導(dǎo)致裂解物非常粘稠，大大降低蛋白提取的得率和純度。
2.3.2 裂解物95℃處理10分鐘，間歇混勻。
2.4 離心收集上清：
充分裂解后，常溫16000 g離心10分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western等操作。
3. 組織蛋白提取：
3.1 手術(shù)切除的組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，洗凈組織血跡，用濾紙吸
干組織表面液體，將組織切成細(xì)小的碎片。
3.2 按照每20 mg組織加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
3.3 用玻璃勻漿器勻漿5-10次，收集勻漿后的裂解混合物，超聲波處理（超聲條件根據(jù)儀器調(diào)整）；如沒(méi)有超聲破碎儀，可以使用注射器用27G針頭處理裂解物10-15次（貨號(hào)：PE2719 ，蛋白提取針頭套裝），以徹底裂解細(xì)胞。
注：裂解中細(xì)胞會(huì)釋放出變性的核酸，呈團(tuán)狀粘稠透明樣，如不進(jìn)行超聲或針頭裂解處理，會(huì)導(dǎo)致裂解物非常粘稠，大大降低蛋白提取的得率和純度。
3.4 裂解物95℃處理10分鐘，間歇混勻。
3.5 常溫16000 g離心10分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western等操作。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
4-18% RealPAGE 預(yù)制膠
電泳條件：1×TGS 穩(wěn)壓200V
38-13mA 50min;染色：FastBlue蛋白染色液染色30min。
樣品1（LD直裂）：2 ml K562細(xì)胞（6.5×106/ml），3000rpm
5min，沉淀用PBS清洗1次，離心后徹底去除PBS，加入130 μl超純水，100 μl5×loading
buffer(變性，還原)，95度10 min，上樣5 μl。
樣品2（4K-BME）：1 ml 4K細(xì)菌細(xì)胞（O/N培養(yǎng)），13000 rpm 5min，離心后徹底去除殘余液體，加入130 μl超純水，100 μl
5×loading buffer，95度10min，上樣7.5 μl。
樣品3：1 ml K562細(xì)胞（5×106/ml），3000 rpm 5
min，沉淀用PBS清洗1次，離心后徹底去除PBS，加入500 μl SDS裂解緩沖液，超聲處理（10%功率，開(kāi)5S，關(guān)10S，2min），冰浴10 min或95度10min，間歇混勻，13000 rpm低溫離心10 min，取上清即為總蛋白。加入5×loading
buffer(變性,還原)調(diào)整樣品濃度為2 μg/μl，95度5min，上樣5，7.5和10 μl。