植物總蛋白提取試劑盒（適用于模式植物）

Plant Total Protein Isolation Kit（for model plant）

● 產(chǎn)品貨號及規(guī)格

● 產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品用于快速提取模式植物的總蛋白，可以處理各種常見模式植物如擬南芥、小麥、煙草、玉米、水稻等植物的葉片、莖和根等。得到的蛋白可用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析。

該試劑盒對模式植物的幼嫩組織有更好的提取效果，衰老組織和富含多糖多酚植物的蛋白提取效果不佳。此類植物的蛋白提取可以選擇通用型植物蛋白提取試劑盒（貨號：RTD8103）。

該試劑盒含有除丙酮外的其他所有試劑，使用方便，能在2小時內(nèi)得到高純度的蛋白樣品。

每次提取使用0.7 ml試劑B-植物蛋白提取緩沖液I計算，該試劑盒可以使用20次。

●  使用方法：

實驗準(zhǔn)備材料：

液氮；研缽；1.5ml離心管；丙酮；70℃水浴鍋；干浴器；冷凍離心機；制冰機；渦旋振蕩器。

I 樣品破碎：

1. 取植物樣本，在液氮條件下，用研缽充分研磨成粉末。

關(guān)鍵步驟：此步驟非常重要，樣本研磨越細(xì)越好，研磨不徹底會導(dǎo)致蛋白濃度偏低。

II 沉淀雜質(zhì)：

2. 取1.5 ml離心管，加入1 ml即用型試劑A（按照下表配制），迅速將約0.1克粉末加入其中，漩渦混勻，RT 放置5分鐘。

關(guān)鍵步驟：樣品粉末量不能超過0.1克，否則將導(dǎo)致蛋白提取得率和純度大大降低。

即用型試劑A-樣本雜質(zhì)去除劑配制

3.12000g4℃離心5分鐘，去除上清，保留沉淀。

注：觀察沉淀顏色，如沉淀顏色為綠色，繼續(xù)步驟4；如沉淀顏色為淺色或白色，跳過步驟4，直接進(jìn)行步驟5。

4. 沉淀中加入1 ml即用型試劑A，漩渦混勻，RT放置5分鐘，12000rpm4℃離心5分鐘。

5. 沉淀中加入1 ml 預(yù)冷的丙酮（自備，試劑盒不提供）和10 μl DTT溶液，漩渦震蕩（此時溶液狀態(tài)應(yīng)為白色懸液），徹底重懸，12000rpm4℃離心5分鐘，去除上清，收集沉淀。

6. 快甩離心數(shù)秒，殘留上清用移液器徹底吸棄，沉淀物通風(fēng)晾干1-2分鐘至沉淀干燥。

  關(guān)鍵步驟：沉淀不能過分干燥，否則會影響以下步驟蛋白的溶解性。

III 蛋白提取：

7. 蛋白沉淀中加入0.7 ml 即用型試劑B（按照下表配制），漩渦震蕩，徹底重懸沉淀（此時溶液狀態(tài)為懸浮溶液）；70℃水浴1小時，間歇混勻。

即用型試劑B-植物蛋白提取緩沖液配制：

8.12000g4℃離心10分鐘，小心取上清（通?？扇?00 μl）于1.5ml離心管中，不要吸取沉淀。

9. 蛋白樣品-20℃貯存或進(jìn)行下游電泳及Western Blot等實驗。

注： ① 如要濃縮蛋白，可以選擇蛋白濃縮試劑盒（貨號：RTD9101）。

    ② 由于提取過程中使用了DTT，為了避免對蛋白濃度測定的影響，建議蛋白濃度測定使用Bradford方法（貨號：RTP7101）。