蛋白濃縮試劑盒（目錄號：RTD9101）
● 試劑盒內(nèi)容及保存：
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貨號
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貯存
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RTD9101-01
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試劑A-沉淀溶液
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10 ml
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RT
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RTD9101-03
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試劑C-助沉劑
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5 ml
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RT
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RTD9101-04
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試劑D-中和液
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250 μl
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RT
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RTD9101-05
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1 M NaCl
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1 ml
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RT
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RTD9101-06
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1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原）
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1 ml
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-20℃
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說明書
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1份
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● 儲存條件和效期：
試劑盒常溫運(yùn)輸；收到后，按照標(biāo)簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年。
● 產(chǎn)品簡介：
試劑盒原理：在酸性條件下蛋白質(zhì)形成不溶性鹽，使蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致構(gòu)象發(fā)生改變，蛋白暴露出較多的疏水性基團(tuán)，蛋白發(fā)生聚集而沉淀。為了避免酸對后續(xù)電泳的影響，沉淀的蛋白要使用丙酮等洗滌液徹底清洗去除酸。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western
blot 前的蛋白樣品處理。
以每次濃縮800
μl蛋白樣品計(jì)算，本試劑盒可以使用40-45次。
● 操作方法：
1. 準(zhǔn)備1.5
ml干凈的離心管，加入800 μl蛋白樣品溶液。
可選：如果樣品溶液中離子強(qiáng)度低于10
mM，補(bǔ)加8 μl的1M
NaCl溶液。低于800 μl的樣品，加入8
μl 1 M NaCl，用水補(bǔ)齊體積至800 μl，使NaCl終濃度為10
mM。
2.
加入蛋白溶液1/10體積的試劑C-助沉劑-80
μl，混勻，常溫靜置15分鐘。
注：加入試劑C后溶液變渾濁。
3. 加入步驟2溶液1/4體積的試劑A
-220 μl，渦旋震蕩10-30秒，使之充分混勻。
4. 冰浴放置15分鐘。
5. 4℃，12000
rpm（13000
g）離心10 分鐘。
注：離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。
6. 小心去掉上清液，保留沉淀。
注：請小心操作，可以用移液器輔助徹底吸棄上清。
7. 沉淀中加入600
μl預(yù)冷的丙酮（自備，試劑盒不提供），渦旋震蕩10-30秒，徹底混勻。
注：丙酮有刺激性氣味，請?jiān)谕L(fēng)櫥內(nèi)操作。
8. 冰浴15分鐘。
9.
4℃，12000
rpm（13000
g) 離心10分鐘；在通風(fēng)櫥中，倒掉上清。殘留上清用10
μl吸頭徹底吸棄，沉淀物通風(fēng)晾干30-60秒。注：沉淀不能過分干燥，否則將導(dǎo)致蛋白不好溶解。
10.
蛋白溶解：
根據(jù)下表選擇溶解緩沖液：
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下游實(shí)驗(yàn)
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溶解緩沖液
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備注
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SDS-PAGE電泳
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1×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（變性，還原）
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試劑盒提供
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加入溶解緩沖液后，徹底溶解沉淀（37℃溫浴處理），溶液正常顏色應(yīng)為藍(lán)色；如果溶液為淡綠色或黃色，加入1/10體積中和液D，使顏色變回藍(lán)色。 95℃ 處理5分鐘，電泳上樣
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BCA蛋白定量
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40mM 碳酸鈉pH11.25
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試劑盒不提供
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BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度
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等電聚焦IEF/2D電泳
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7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4
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試劑盒不提供
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酶切實(shí)驗(yàn)
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100 mM碳酸氫銨 pH8.5
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試劑盒不提供
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●實(shí)驗(yàn)示例：
